Internationales Rules for

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1 Regls Règles Interntionl Interncionles Interntionles Rules pr pour el les Testg Análisis Essis ls Semills Semences Interntionle Vorschriften für die Prüfung von Stgut 2017 Méthos vlidées pour nlyse snitire s Vlidted Helth Testg Methods Vlidierte Methon zur Gesundheitsprüfung von Stgut 7 032: 7-032: : Nchweis Detection Détection von on sur n Spci olerce Spci (Spt) (spch) olerce Smen seed(éprd) Incluye Inklusive Inclus Includg les cmbios Änungen chnges chngements y correcciones und editoril redktionelle règles corrections editoriles et Korrekturen doptds dopted éditoriles t verbschiet en l doptées uf lors Reunión Ordry orntlichen l Generl réunion Generlversmmlung Anul Meetg nnuelle 2016, 2017, générle Tlln, Denver, 2017, Estoni 2017, USA Denver, Étts-Unis USA Gültig Effectives A prtir b l from 1. u 1 Jnur 1er 1 Jnury enero jnvier

2 Vlidierte Chpter Méthos 7: Methon vlidées Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse Helth snitire Testg Methods s von Stgut Regls Interntionle Règles Interncionles Interntionles Vorschriften Interntionl pr pour für el les die Análisis Rules Essis Prüfung von ls Semences Semills Stgut Testg Vlidierungsstudien Étus Vlidtion reports vlidtion Siehe Voir See Références. References. Literturquellen. Les Copies copies Kopien re sont vilble sd disponibles erhältlich by e-mil u per secrétrit from E-mil ist.fice@ist.ch ISTA l ISTA Secretrit pr courriel t durch ist.fice@ist.ch. ds ISTA-Sekretrit. Kommentre, Merci Plese d envoyer send comments, Empfehlungen les commentires, suggestions o Berichte suggestions or reports zu Problemen ou problems sign- betreffend lement reltg to this problèmes dieser method Metho sur to cette sd ISTA métho bitte bitte n n ds Helth u ds responsble ISTA Committee, ISTA He- du Helth ISTA c/o ISTA Committee Secretrit. Helth über Committee, über die die Adresse c/o s Secrétrit s ISTA-Sekretrites l ISTA. zu zu richten. richten. Limittion Disclimer responsbilité Hftungsusschluss En Whilst dépit ISTA du so hs pris tken pr cre l ISTA to pour ensure ssurer ccurcy l exctitu s Obgleich méthos methods die et ISTA s mtions mit Sorgflt scribed uf contenues die Richtigkeit this dns method l scrip- diesetion, Methonbeschreibung s ISTA méthos, shll not l ISTA lible décle ngegebenen ny toute loss responsbilité or Methon dmge, pour und etc. In toute resultg mtionen perte from ou dommge, chtet, use hftet this etc., sie method. résultnt nicht für jeglichen l utilistion Verlust, l Schn présente métho. etc., us Verwendung dieser Metho resultiert. Sicherheitsmßnhmen Sécurité Sfety precutions Der Assurez-vous Ensure sichere you Umgng re connître fmilir mit Gefhren les with risques hzrd im et mikrobiologischen dt prenez les tke me- Lbor sures pproprite und sécurité die sfety die Berücksichtigung precutions, ppropriées. especilly entsprechen Il est supposé durg Vorsichts- que weighg Vorsichtsmßnhmen, métho out gredients. est prtiquée sbesone It dns is ssumed un während lbortoire während tht persons Herstellung microbiologie crryg cette Kulturmedien, pr out s this personnes test re m m fmilières Autoklvieren lbortory s prcipes suitble und und Auswiegen Auswiegen crryg bonnes prtiques microbiologicl lbortoire, sd sd procedures zu zu gewährleisten. bonnes prtiques fmilir Es Es wird with wird vorusgesetzt, microbiologie, vorusgeset- prciples Bestteile, out Be zt, dss et Good s dss diese techniques Lbortory diese Arbeitsschritte d sepsie. Prctice, eem Good Tous eem mikrobiologischen Microbiologicl les déchets doivent Prctice, Lbor être Lbor durch trités septic Mitrbeiter d une durch mnière techniques. Mitrbeiter durchgeführt ppropriée durchgeführt Dispose wern, (pr ll exemple wern, die wste mit utoclvge, n mterils die Przipi- mit n Przipien désfection) n pproprite Guten et Lborprxis, Guten wy selon (e.g. Lborprxis, s règlements utoclvg, Guten Mikrobiologischen Guten locux disfection) sécurité. Prxis Prxis und ccordnce und sterilen with sterilen Arbeitstechnik locl Arbeitstechnik helth, vertrut environmentl vertrut sd. Alle sd. Abfllstfe Alle sfety Abfllstfe sd regultions. uf geeignete sd uf geeignete Weise und Weise entsprechend und entsprechend vor Ort üblichen Ort Gesundheits-, üblichen Gesundheits-, Sicherheits- Sicherheits- und Umweltbestimmun- und Umwelt- vor bestimmungen zu entsorgen zu (z. entsorgen B. durch Autoklvieren, (z. B. durch Desfizieren). Autoklvieren, Desfizieren). Anmerkung Note on use zur Benutzung trnsltions Übersetzungen Remrque sur l utilistion s trductions Die The elektronische electronic version Version enthält Interntionl die englische, Rules frnzösische Testg und utsche clus Version English, ISTA-Vorschriften. L French version électronique Germn Bei versions. irgendwelchen s règles If If re re clue re Frgen re ny les ny questions versions bezüglich en on terprettion nglis, Interprettion en frnçis et ISTA-Vorschriftem. English Pour ist English version die toute englische question version fitive Version is d terpréttion fitive die version. mssgebliche s version. règles, Version. seule l version nglise fit en Rules, lle- Rules, foi. Herusgegeben von : Interntionlen Éditées pr : Vereigung für Stgutprüfung (ISTA) Zürichstr. L Assocition 50, 8303 Interntionle Bssersdorf, d Essis Schweiz Semences (ISTA) Zürichstr. Publicdo 50, por8303 Bssersdorf, Suisse 2018 The Published Interntionl by Testg Assocition (ISTA) (ISTA) 2018 Zürichstr. The Interntionl pr 50, l Assocition CH-8303 Bssersdorf, Testg Interntionle Assocition Suiz d Essis (ISTA) Semences (ISTA) Onle Zürichstr. ISSN 50, CH-8303 Bssersdorf, Switzerl Onle 2017 ISSN Interntionl Testg Assocition (ISTA) Titel 2018 Interntionl englischen Origlusgbe: Testg Assocition Interntionl (ISTA) Rules Testg Titre Onle ISSN l édition origle nglise : Interntionl Rules Testg Alle Onle Rechte ISSN vorbehlten Ke Teil dieses Werkes drf irgendwelcher Form o durch Tous irgendwelchem Todos droits los echos réservés. Verfhren, reservdos. Aucune sei prtie Ngun elektronisch, cette prte mechnisch, publiction ést publicción ne durch peut Fotokopie être pue reproduite, ser o reproducid, All rights lmcend dns o reserved. le système durch en irgen No ngún prt récupértion sistem eres this publiction ou Verfhren recuperción être trnsmise my reproduziert, be reproduced, trsmitid sous ucune gespeichert stored culquier me o ou ny m pr verbreitet retrievl ucun o en Tonufnhme stockée moyen, wern, culquier system or électronique, ohne medio, trnsmitted vorherige electrónico, mécnique, ny schriftliche m mecánico, or photocopint, by Genehmigung ny fotocopi, mens, enregistrnt grbción electronic, Interntionlen o ou mechnicl, utrement, culquier Vereigung otro photocopyg, sns tipo, permission Stgutprüfung. permiso recordg ntérieure previo or orwise, y pr por écrit escrito without l ISTA. prior l ISTA. permission writg from s für el ISTA A prtir Effectives Gültig l b 1 1. er Jnury jnvier enero

3 Règles Regls Interntionle Interntionles Interncionles Rules Vorschriften pour pr für les Testg el die Análisis Essis Prüfung Semences von ls Semills Stgut Vlidierte Méthos Chpter Methon vlidées 7: Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse snitire Helth Testg s von Methods Stgut 7 032: 7-032: : Nchweis Detection Détection von on sur n Spci olerce Spci (spch) (Spt) olerce Smen seed (éprd) Wirtspflnze: Hôte Host: : Spci Spci olerce olerce L. L. Pthogen(s): Krnkheitserreger: Pthogène(s) : Kleb. Kleb. Kleb Prépré Prepred Erstellt durch: pr by: : du du du Toit, Toit, Toit, L. L. L. J. J. 1, 1 J., Gilijmse, 1 Gilijmse,, E. E. 2, E. 2, Oosterh, Oosterh, 2, J. J. 2, Hiddk, Hiddk, G. G. 3 3 et und Politikou, Politikou, L. L. 4 L Deprtment Deprtment Plnt Plnt Pthology, Pthology, Wshgton Wshgton Stte Stte University Mount Plnt Vernon Pthology, NWREC, Wshgton Stte Stte Route Uni- University Mount Vernon NWREC, Stte Route 1 Deprtment 536, versity Mount Vernon, WA NWREC, , USA. Stte Route 536, Mount Vernon, WA , USA. Emil: 536, Mount dutoit@wsu.edu Vernon, WA , USA. 2 Emil: dutoit@wsu.edu Rijk Emil: Zwn dutoit@wsu.edu Breedg B.V.,Burgemeester Crezéeln 2 2 Rijk Zwn Breedg B.V.,Burgemeester Crezéeln Rijk 40, Zwn P.O. Box Breedg 40, 2678 B.V.,Burgemeester ZG De Lier, The Crezéeln Nerls. 40, P.O. Box 40, 2678 ZG De Lier, The Nerls. Emil: 40, P.O. j.oosterh@rijkzwn.nl, Box 40, 2678 ZG De Lier, e.gilijmse@ The Nerls. rijkzwn.nl Emil: Emil: j.oosterh@rijkzwn.nl, j.oosterh@rijkzwn.nl, e.gilijmse@ 3 Enz rijkzwn.nl e.gilijmse@rijkzwn.nl Zn Opertions B.V., P.O. Box 7, 1600 AA 3 Enz Enz Enkhuizen, Zn Zn The Opertions Opertions Nerls. B.V., B.V., P.O. P.O. Box Box 7, 7, AA AA Emil: Enkhuizen, g.hiddk@enzzn.nl The Nerls. 4 ISF, Emil: 7 Chem g.hiddk@enzzn.nl du Reposoir, 1260 Nyon, Switzerl. 4 ISF, Emil: 7 Chem lin.politikou@ufs-sso.com du Reposoir, 1260 Nyon, Switzerl. Emil: lin.politikou@ufs-sso.com Historique s révisions Revisionsst history Version 1.0, : Nouvelle métho Version 1.0, : Neue New Metho method Historique Bckground Htergrund Deux méthos d cubtion sont décrites pour l détection Two Zwei cubtion Inkubtionsmethon methods sur re sd scribed für d éprd n Nchweis : un tection test von sur gr sur le milieu NP-10 n Sptsmen on gr spch (du Toit seed; beschrieben; et l., gr 2005; test Iglesis- e on Agrtest uf gr et NP-10 l., medium 2013) Agr et (du (du un Toit test et sur et l., buvrd 2005; vec Iglesis-Grci congéltion NP-10 Grci et (Derie l., 2013) et l., und 1988; ee du ep-freeze Gefrier-Filterppier-Metho Toit et Hernez-Perez, blotter test (Derie 2005; (Derie et l., du 1988; Toit et l., et 1988; du l., Toit 2005; du Toit du Hernez-Perez, Toit und et Hernez-Perez, Derie, 2008; 2005; Block 2005; du et Toit Shepherd, du Toit et l., et 2005; 2008; l., 2005; du Cummgs Toit du Toit Derie, et und l., Derie, 2008; 2009; 2008; Block du Toit, Block 2011; Shepherd, und Shepherd, Strd 2008; Cummgs protocol 2008; Cummgs NAKtubouw, et l., 2009; et l., du 2011; 2009; Toit, Villrroel-Zebllos du 2011; Toit, Strd 2011; Strd protocol et l., NAKtubouw, 2012). protocol Les NAKtubouw, ux 2011; méthos Villrroel-Zebllos 2011; ont été Villrroel-Zebllos vlidées dns et l., ux 2012). et tests l., Both comprtifs 2012). methods Bei terlbortoires Methon were vlidted sd orgnisés jeweils ech zwei pr two l Interntionl Vergleichsuntersuchungen Helth Inititive vlidiert wurn, Vegetbles, die von ISF Interntionl (ISHI-Veg). comprtive tests orgnised by Interntionl Helth Inititive Helth L métho Inititive NP-10 Vegetbles, gr été ISF montrée (ISHI-Veg) comme orgnisiert wurn. pour tester s non tritées et n est ps étnt Vegetbles, ISF (ISHI-Veg). dptée The NP-10 gr method ws shown to be suitble recommée Für die NP-10 pour Agr tester Metho s wur gezeigt, tritées pr dss fongicis für die qui Untersuchung peuvent diffuser von dns unbeheltem le milieu, conduisnt Stgut poten- geeig- diese testg non-treted seed is not recommend fungici-treted seed s fungicis my diffuse to tiellement net ist und à nicht une surestimtion empfohlen wern s niveux knn für réels die Untersuchung medium, sur von les Fungizid-beheltem potentilly qu resultg l objectif Stgut, est n d overestimtion détermer ds Fungizid si le s tritement Medium relevnt diffundiert und est levels dmit efficce on zu contre eer seeds Überschätzung when porté objective s pr eigentlichen les is to terme (du Toit, if Beflls 2011). seed m Il tretment Stgut est possible führen is effective que knn les ntibiotiques gst wenn Ziel seedborne contenus Untersuchung dns le die milieu (du Wirksmkeit Toit, NP ). gr eer Likewise, ffectent Stgutbehlung illeurs ntibiotics certs gegen NP-10 tritements gr medium (du biocontrôle, Toit, my 2011) ffect conduisnt ist. some Wei- pr lors biologicl terh à können une control surestimtion die Antibiotik seed tretments du niveu im NP-10 dversely, contmtion Agr biologische potentilly s. resultg Stgutbehlungen Le overestimtion test sur nchteilig buvrd est beeflussen, utilisble levels fected sur worus seed. ee tritées et non tritées d éprd. Mesures sécurité Überschätzung The blotter ssy s is Infektionslevels suitble both resultieren treted knn. nontreted spch seed. ist sowohl für beheltes ls Die Filterppieruntersuchung uch Assurez unbeheltes vous connître Stgut von les Spt risques geeignet. et ppliquez les mesures sécurité ppropriées, prticulièrement lors l Sfety preprtion precutions s milieux, l utoclvge et l pesée s Sicherheitsmßnhmen grédients. De toute évince, cette procédure est mise en plce dns un lbortoire microbiologie pr du personnel mé sichere ux Umgng Bonnes mit Prtiques Gefhren Lbortoire im mikrobiologischen et Bonne Ensure you re fmilir with hzrd dt tke Der pproprite sfety precutions, especilly durg Lbor Prtique und die l Berücksichtigung Microbiologie et ux entsprechen techniques Vorsichtsmßnhmen, Elimez tous sbesone les déchets mtériels während d une Herstellung mnière ppro- d sepsie. preprtion medi, utoclvg weighg out gredients. It is ssumed tht this procedure is beg Kulturmedien, priée (utoclve, m désfection) Autoklvieren et en und conmité Auswiegen vec Bestteile, régles locles sd d hygiène, zu gewährleisten. d environnement Es wird et vorusgesetzt, sécurité. les crried out microbiologicl lbortory by persons dss fmilir diese with Arbeitsschritte prciples eem Good mikrobiologischen Lbortory Prctice, Lbor Good durch Microbiologicl Mitrbeiter durchgeführt Prctice, wern, septic die techniques. mit n Przipien Semences Dispose ll Guten wste tritées Lborprxis, mterils Guten n pproprite Mikrobiologischen by Prxis utoclvg und sterilen or disfectg) Arbeitstechnik vertrut ccordnce sd. wy (e.g. Cette with Alle locl Abfllstfe métho helth, est sfety sd utilisble uf geeignete environmentl sur Weise non regultions. und tritées entsprechend tritées vor Ort pr üblichen process Gesundheits-, physiques (p. Sicherheits- ex. eu chu) und et ou Umweltbestimmungen chimique (p. ex. chlore) zu entsorgen dns le but (z. B. durch désfecter Autoklvieren, Desfizieren). étnt seed entendu que les résidus, s ils sont pré- ou désfester, Treted sents, n fluencent ps l essi. Il est l responsbilité l utilisteur The NP-10 method vérifier is s il suitble y ntgonisme non-treted et/ou hibition seed Beheltes pr seed nlyse, tht hs spikg, been treted ou (gebeiztes) comprison usg physicl expérimentle. Stgut (e.g. hot wter) or chemicl L métho (e.g. NP-10 chlore) n est ps processes recommendée with sur im Die tritées disfesttion/disfection, NP-10 pr Metho fongicis ist (du geeignet Toit, provid 2011), für unbeheltes ou tht ny residue, Stgut tritées if und pr present, s Stgut, gents does not dss fluence biocontrôle mit physiklischen ssy. une It prt is (z. B. responsibility l objectif Heißwsser) du o test est chemischen user to vérifier check (z. l efficcité B. Chlor) such ntgonism Mitteln du tritment zum /or Zweck contre hibition V. Desfektiolie by nlysis, sur les behelt. smple spikg, wur Si les unter or experimentl Vorussetzung, sont tritées comprisons. dss s dh- lle gents The etwigen NP-10 biocontrôle, Rückstän method le is tritement not die recommend Untersuchung biologique nicht pourrit fungicitreteflussen. pr Es seeds les liegt ntibiotiques (du Toit, Verntwortung 2011), contenus dns s seeds Anwens le milieu treted NP-10 diese with bee- être ffecté gr, biologicl Antgonismen dimunt control und potentiellement gents Inhibierungen if prt l efficcité durch objective Untersuchungen, du tritement ssy contre is Zusätze to ssess V. o how nlytische well porté tretment pr Vergleiche les on zu prüfen. seed et impliqunt works gst s comptges seedborne Die NP-10 V. plus. élevés. Metho If Les seeds ist nicht re treted empfohlen tritées with pr für biologicl fongici Fungizid-beheltes gents, terférer Stgut dns biologicl l (du nottion Toit, tretments 2011), du test o cr my les mit be fongicis ffected biologi- peuvent control diffusent dversely schen Mitteln dns by beheltes l gr, ntibiotics dimunt Stgut, potentiellement wenn NP-10 Teil gr l efficcité medium, Untersuchung tritement die Bestimmung du potentilly dimishg contre tout V. Wirksmkeit efficcy porté pr les Behlung tretment et gst gegen conduisnt V. ny seedborne à s ist. niveux Bei biologisch détection beheltem resultg plus élevés elevted Stgut (du Toit, können 2011). die biologischen Behlungen durch die Antibiotik L métho im NP-10 sur Agr buvrd nchteilig est utilisble beeflusst sur wern, ws non counts. s treted with fungici(s) my terfere with redg test becuse fungicis redily diffuse tritées, die Wirksmkeit et tritées Behlung pr process gegen smenbürtigen physiques (p. ex. V. to gr medium, potentilly dimishg efficcy eu chu) vermt ou chimique und zu eer (p. ex. erhöhten chlore) Pthogenzählung (du Toit et Hernez-Perez, Fungizid-behelte 2005) dns Smen le but können désfecter ds Testergebnis / dés- tretment gst ny seedborne führt. resultg cresed levels tection (du Toit, 2011). beeflussen, fester, étnt entendu d Fungizi que les résidus, n Agr si ils diffundieren sont présents, und ddurch n fluencent The blotter die Wirksmkeit ps method l essi. is Il suitble est Behlung l responsbilité non-treted gegen smenbürtigelisteur V. seeds, l uti- seeds treted vérifier with verrgern s il physicl y ntgonisme und (e.g. zu hot eem wter) et/ou erhöhten hibition or chemicl Nchweis nlyse, führt chlore) spikg, (du Toit, processes ou 2011). comprison (du Toit expérimentle. Hernez-Perez, L mé- pr (e.g. 2005) tho Die sur with Filterppiermetho buvrd im est ussi disfesttion/disfection, utilisble ist geeignet pour für unbeheltes provid tritées tht Stgut pr fongicis ny und residue, Stgut, (du if Toit present, dss et mit l., does physiklischen 2005; not du fluence Toit et (z. l., B. ssy. 2007; Heißwsser) is Toit et o responsibility l., chemischen 2009; du Toit (z. et B. l., Chlor) user 2010) Mitteln to et check (du Toit such tri- du It tées ntgonism Hernez-Perez, pr gents /or biocontrôle 2005) hibition zum by (Cummgs Zweck nlysis, Desfektion et smple l., 2009). spikg, be : 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) Gültig A Effectives prtir b l 11. 1Jnury 1 er jnvier enero

4 Vlidierte Chpter Méthos 7: Methon vlidées Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse Helth snitire Testg Methods s von Stgut Regls Interntionle Règles Interncionles Interntionles Vorschriften Interntionl pr pour für el les die Análisis Rules Essis Prüfung von ls Semences Semills Stgut Testg 7 032: 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) helt or L experimentl métho wur unter été comprisons. vlidée Vorussetzung, sur Blotter dss method tritées lle etwigen pr is Thirme et méthlxyl die seed Untersuchung treted (ussi with ppelé nicht fungicis méphénoxme) beeflussen. (du Toit (du Es et Toit, liegt l., lso Rückstän suitble 2005; 2011; Gillijmse du Verntwortung Toit et et l., Politikou, 2007; s Anwens du 2015). Toit et Dns l., diese 2009; l Antgonismen bibliogrphie, du Toit et l., und cette 2010) Inhibierungen métho seeds ussi durch treted été utilisée Untersuchungen, with biologicl pour tester control s Zusätze gents o (Cummgs nlytische tritées pr d utres Vergleiche et l., 2009). fongicis zu prüfen. et s Die gents Filterppiermetho biocontrôle ist (du uch The Toit geeigent et method l., 2007; für hs Fungizid-beheltes Cummgs been vlidted et l., 2009; Stgut du thirm Toit (du et Toit l., metlxyl-m 2009; l., du 2005; Toit du et (lso l., Toit nmed 2010). et l., mefenoxm) 2007; du Toit treted et l., seeds 2009; (du Toit, et 2011; l., 2010) Gillijmse und Stgut Politikou, behelt 2015). mit In biologischen published literture Mitteln (Cummgs this method l., lso 2009). hs been used to test seeds treted Tille Die with Metho d échntillon or wur fungicis für Thirm biologicl und Metlxyl-M control gents (uch (du beknnt Toit et ls l., Mefenoxm) 2007; Cummgs beheltes et l., Stgut 2009; du vlidiert Toit et (du l., 2009; L Toit, tille 2011; du Toit l échntillon Gillijmse et l., 2010). (nombre Politikou, totl 2015). In testées) Litertur l gibt tille es weitere s sous-échntillons Nchweise zur dépennt Anwendung l tolérnce Metho et strd Stgut désirée behelt (nombre mit mximl eren cceptble Fungizin und biologischen Kontrollmßnhmen et l limite (du détection Toit et l., (nombre 2007; Cum- mi- contmées) Smple size mum mgs théorique et l., 2009; du propgules Toit et l., du 2009; pthogène du Toit pouvnt et l., 2010). être détectées). L tille mimum recommée l échntillon est 400 vec une tille mximle sous- The smple (i.e., totl number seeds tested) or subsmple échntillon Probengröße size to tested 100 pends. on sired tolernce strd (i.e., mximum cceptble percentge seeds fested) Die Probe tection (Gesmtzhl limit (i.e., untersuchter oreticl Smen) mimum o number Teilprobengröße, pthogen propgules die untersucht per wird, seed ist which von cn erwrteten be tected). Tole- In Mtériel rnz eir (mximl cse, kzeptbler mimum Prozentstz recommend fizierter smple Smen) size is Note und 400 seeds : Tous Nchweisgrenze with les mtériux mximum (oretisch suivntes subsmple kleste sont size s Zhl 100 pots von seeds. critiques Eheiten contrôle je (CCP). Smen, die nchgewiesen wern) fektiösen bhängig. Die empfohlene Mstprobengröße beträgt Pour 400 Mterils Smen. l métho Die Teilprobengröße NP-10 : drf 100 Smen nicht überschreiten. NP-10 Note: All gr en boîtes followg plstique mterils : 10 cm re x criticl 10 cm, jusqu à control pots 34 (CCP). pr boîte (Hfmn Mnufcturg, Inc.) Mteril ou NP-10 Boîtes method Petri : 9.0 cm dimètre, 25 pr Hweis: boîte Alle folgenn Mterilien Kritische NP-10 Kontroll-Punkte gr crylic (KKP). boxes: 10 cm x 10 cm, up to 34 Pour seeds l per métho box (Hfmn sur buvrd Mnufcturg, : Inc.) or Für Petri die dishes: NP cm Metho dimeter, 25 seeds per plte Boîtes plstique : NP-10 Blotter 20 Agr cm method x 14 Acrylboxen: cm (DBP plstics), 10 cm x 100 cm, bis zu pr 34 Smen boîte ouje Box (Hfmn Mnufcturg, Inc.) o Petrischlen: Acrylic 10 boxes: cm x 9,010 cm (Hfmn Durchmesser, Mnufcturg, 25 Smen Inc.), je Petrischle jusqu à 20 cm 34 x 14 cm (DBP pr plstics), boîte ou 100 seeds per box boîtes or Petri: 9.0 cm dimètre, 25 pr boîte 10 cm x 10 cm (Hfmn Mnufcturg, Inc.), Buvrd Für die pour Filterppiermetho boîtes plstique : Steel blue germtion up to 34 seeds per box or blotter pper, Anchor Pper Co., p. ex. D , All Petri dishes, 9.0 cm dimeter, 25 seeds per plte Acrylboxen: Pper BV, ou équivlent Blotter-pper crylic boxes: Steel blue germtion Buvrd 20 cm pour x 14 boîtes cm (DBP Petri plstics), : Steel 100 blue Smen germtion je Box blotter pper, Anchor Pper Co., e.g. D , All blotter o pper, Anchor Pper Co., p. ex. Cns 2.84.r, All Pper BV, or equivlent Pper 10 cm BV, x ou 10 équivlent cm (Hfmn Mnufcturg, Inc.), bis Congélteur Blotter zu 34 pper Smen : cpble je pltes: Box o fonctionner Steel blue germtion à -20 ± 2 C blotter Petrischlen: pper, Anchor 9,0 Pper cm Co., Durchmesser, e.g. Cns 2.84.r, 25 Smen All Pper je Petrischle BV or equivlent Filterppier Freezer: cpble für Acrylboxen: opertg t Steel -20 ±2 blue C germtion blotter pper, Anchor Pper Co., z. B. D , All Pper BV, o gleichwertig. Filterppier Mtériel Common commun mteril für Petrischlen: ux both ux Steel methods méthos blue germtion blotter pper, Anchor Pper Co., z. B. Cns 2.84.r, All Mtériel Reference Pper BV, mteril: référence o gleichwertig use : souche reference connue cultures, Gefrierschrnk: ou or connues geeigent seed lots comme zum known Betrieb étnt to bei contmées -20 fected ± 2 Cwith pr Sterilised Pces stériles ceps Incubtor: Gemesmes Etuve : cpble cpble Mteril fonctionner opertg für à bei t C, Methon C, équipée equipped with lumière ner proche ultrviolet ultrviolette light (NUV, (NUV, pek pic à t nm) nm) et s Referenzmteril: cool néons fluorescent lumière white Verwendung blnche light ees Referenzisoltes Dissectg Loupe von boculire microscope: o : grossissement Smen, von mgnifiction nen beknnt ist, dss diese mit fiziert sd Sterile Pzetten Inkubtor: Préprtion geeignet zum l échntillon Betrieb bei C, Ausstttung mit Ultrviolett-nhem Licht (NUV, Pek bei Smple preprtion Le test 360 est nm) rélisé und kltes sur un fluoreszierens échntillon weißes trvil Licht 400 Mikroskop: comme décrit Vergrößerung dns l section s Interntio- The test is crried out on workg smple 400 seeds s scribed section Interntionl Rules nl Rules Testg. Testg. Probenvorbereitung Méthos Methods Die Prüfung erfolgt n eer Untersuchungsprobe von 400 Note Smen : Toutes wie les étpes Abschnitt décrites ici sont ISTA-Vorschriften importntes et beschrieben. Note: doivent All être steps suivies scribed telle qu diquée here re Les importnt pots critiques should be contrôle followed sont s mentionnés written. Criticl pr CCP. control pots re dicted by CCP. Methon 1. Préprtion s d éprd 1. Les Preprtion d éprd, spch seeds excepté celles tritées pr fongicis, Spch Alle s seeds, hier gents except beschriebenen those biocontrôle treted Schritte et with s fungicis, désfectnts sd wichtig Hweis: comme biologicl und sollten le chlore control wie beschrieben ou gents l eu chu, egehlten disfectnts doivent wern. être like désfectées blech, sche en Kontrollpunkte surfce or hot wter, comme sd need suit: mit to be KKP surfce gekennzeichnet. sterilised s Kriti- 1.1 Plcer follows: les dns une boule à thé Immerger Vorbereitung Plce seeds l boule Spt-Smen à te thé strer. vec les dns une 1.2 solution Spt Immerse Smen, à 1.2% te mit strer Ausnhme NOCl with pendnt von seeds Fungizid-behelten, Cl solution Biologisch-beheltem constnt 60 s with l boule, constnt und pour mnul sfiziertem que les gittion z. B. 60 s sous 1.2% gittion NOmnuelle soient mit strer Chlorbleiche gitées to constmment keep o Heißwsser, seeds pendnt swirlg wern les throughout 60 s. wie S ssurer nchfolgend 60 s. le Mke volume beschrieben sure tht l sfiziert: solution volume 1.2% 1.2% NOCl couvre solu- que 1.1 totlement Smen tion covers e l boule Teesieb te strer à thé legen. (CCP). fully (CCP) Retirer Etuchen Remove l boule s te strer à Teesiebs thé from l mit solution n 1.2% Smen NOCl 1.2% NOCl, solution, shke l excès f für excess liqui 60 s mit liquid, et konstnter immerger immerse l mnueller boule et te Be- les 1,2% égouter NOCl-Lösung wegung strer s dns Siebes, seeds l eu um sterilised, die désionisée/ou Smen ionised/or während distillée distilled 60 stérile s zu dns verwirbeln. wter un petit smll Sicherstellen, becher glss en beker verre dss pendnt ds 30 Volumen s with 30 s constnt sous gittion NOCl-Lösung 1,2% gittion. constnte. Use enough Utiliser ds Teesieb wter l eu vollständig to fully en quntité immerse beckt suffisnte (KKP). te 1.3 pour Entfernen strer immerger s seeds Teesiebes totlement (CCP). us l boule 1,2% à thé igen et les NOCl-Lösung, Abschütteln überschüssiger Flüssigkeit und tu- (CCP). 1.4 Repet rse step twice more, usg new btch 1.4 Répéter chen s l étpe Teesiebes rçge mit n ux Smen fois supplémentires, sterilisiertem, sterilised, ionised/distilled wter ech rse. en ionisiertem utilisnt / l eu stilliertem sionisée/ou Wsser distillée eem stérile kleen nouvelle Glsbecher à chque für rçge. 30 s mit konstntem Rühren. Verwen- 1.5 Usg septic technique, spred seeds onto dry, sterilised pper towel lmr flow hood or 1.5 Etler dung von septiquement usreichend les Wsser, um ds sur Teesieb un ppier und sec die biologicl sfety cbet to dry thoroughly t lest et Smen stérile vollständig sous hotte etuchen à flux lumire zu lssen ou (KKP). poste sécurité Wieholen m. microbiologique s Spülschrittes pour qu elles zwei sèchent weitere pendnt Mle, mit u 1.6 mos neuem Usg septic 60 sterilisiertem, mn. techniques, ionisiertem plce / surfce-sterilised, stilliertem Wsser dried für seeds septiquement je Spülung. sterilised, les disposble désfectées Petri dish en or sur- 1.6 Plcer 1.5 fce An or eem et sterilised sèches Sterilrbeitspltz dns conter. une boîte s mit steriler should Petri jetble Arbeitstechnik: stored stérile t ou Verteilung room utre temperture récipient Smen (pproximtely stérilisé. uf trockenem, Les sterilisiertem C) doivent no être Ppiertuch longer thn und à 24 mstens temperture h bee pltg. 60 mbinte m gründlich (environ trocknen C) conservées pendnt Steriles Positive Arbeiten: mos control (reference Verteilung 24 h vnt mteril) d être oberflächen-sterilisierten, getrockneten Smen eer sterilen ensemencées. Petrischle A prtir Effectives Gültig l b 1 1. er Jnury jnvier enero

5 Règles Regls Interntionle Interntionles Interncionles Rules Vorschriften pour pr für les Testg el die Análisis Essis Prüfung Semences von ls Semills Stgut Vlidierte Méthos Chpter Methon vlidées 7: Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse snitire Helth Testg s von Methods Stgut 2. Témo o For eem blotter positif eren method, (mtériel sterilisierten plte référence) septiclly, Behälter. seeds Aufbewhrung known l V. Smen métho -fected bei sur Rumtempertur buvrd, spch plcer seed (c. septiquement lot C) on blot- für Pour les nicht ter länger sterilised ls d un boxes 24 h lot vor m Petri weiteren dishes s d éprd Arbeiten. reference connu 2. comme Positivkontrolle seed lot étnt obtg fecté (Referenzmteril) pr isolte(s) V. sur. buvrd en The boîtes stérilisées Bei number Filterppiermetho, ou seeds en boîtes to be plted Petri steriles comme boxes Auslegen or lot pltes référence will V. pour -fizierten pend obtenir on s fection isoltts Sptsmen level V.. uf Filterppier positive Le nombre control sterilen seed lot. Boxen For à déposer o NP-10 Petrischlen sur gr boîte method, ls dépend Referenzmteril subculture du pourcentge ref- für d fection erence die Erzeugung isolte du témo von V. -Isolten. positif. onto Pour NP-10 l métho Die gr. Anzhl Incubte NP-10, repiquer uszulegenn reference un isolt isolte Smen or référence ist boxes vom s Infektionslevel rest sur NP-10 Positivkontrolle Incuber or Petri l isolt bhängig. dishes Bei référence seed NP-10 lot(s) ou les beg Agrmetho boîtes tested. l gr. boxes NP-10 même wird Method e fçon Referenzisolt que le reste von s V. boîtes du lot uf NP-10 Agr 1. Pltg testé. ngezogen. Inkubtion s Referenzisoltes o Petrischlen wie die Untersuchungsproben. 1.1 Use sterilised crylic boxes lids or sterilised Petri dishes contg NP-10 gr medium (CCP). NP-10 Métho Metho NP Asepticlly, un lmr flow hood, plce mximum 34 seeds evenly spced ech crylic box 1. Ensemencement Auslegen 10 cm x 10 cm onto NP-10 gr medium (Fig 1). 1.1 Utiliser Verwendung s boîtes von sterilen plstique Acrylboxen stérilisées und vec Deckeln couvercle o ou To sterilen s plte boîtes Petrischlen 100 seeds per mit stériles subsmple, NP-10 contennt Agr use (KKP). le three milieu boxes, NP gr with An eem (CCP). 34 seeds Sterilrbeitspltz ech mit first steriler two boxes, Arbeitstechnik: Plcer seeds Auslegen septiquement von third mximl box (CCP). sous 34 Smen hotte à gleichmäßig flux lumire verteilt un 1.3 mximum Press je ech Acrylbox seed 34 to von 10 gr cm bien medium x 10 espcées cm slightly uf dns NP-10 to chque Agr boîte prevent (Abb. plstique 1). seeds Zum from Auslegen 10 rollg cm von x round cm when Smen sur milieu je boxes Teilprobe NP-10 re gr moved. wern (Fig Close 31). Boxen Pour ech benötigt ensemencer box with mit 34 sterilised 100 Smen lid. n pr ersten souséchntillon, bein Boxen (CCP) utiliser und 32 trois Smen boîtes vec dritten 34 Box (KKP). dns 2. Incubtion 1.3 chcune Incubte Leichtes s Andrücken ux seeds premières t Smen boîtes C un im et Agr 32 dy/night zur Vermeidung troisième s 12 h Wegrollens boîte light (CCP). (ner-ultrviolet Smen, wenn [NUV] die Boxen cool be- cycle dns l 1.3 Appuyer white wegt wern. fluorescent légèrement Verschließen light)/12 chque h semence drk. Boxen sur le mit milieu sterilem f 3. Exmtion d empêcher Deckel. que (CCP) les ne roulent ps qu les boîtes At Inkubtion 5, 9 sont (KKP) bougées. 14 d fter Fermer pltg, chque remove boîte vec lid un couvercle ech Inkubtion box stérilisé. or Petri dish Smen exme bei C seeds mit Tg/ Incubtion V. Ncht-Wechsel usg (CCP) von dissectg 12 h Licht microscope (Ultrviolett-nhes (8 100 Incuber mgnifiction). Licht [NUV] les und kltes à C weißes Fluoreszenzlicht)/12 vec un cycle h 3.2 Compre Dunkelheit. lumière ny (proche suspect ultrviolette isoltes [NUV] et lmpes to fluorescentes positive Untersuchung control lumière (KKP) isolte blnche) or seed / 12 lot. h d obscurité Observtion Record An Tg 5, 9 number und (CCP) 14 nch V. m -fected Auslegen, Entfernung seeds per s box Deckels et 14 t ech j près redg Box ensemencement, o dy. Petrischle enlever und le Untersuchung couvercle chque Smen boîte uf ou V. boîte Petri unter et Verwendung observer les ees Mikroskops l présence (8 100 Vergrößerung). sous loupe boculire pour Blotter 3.2 (grossissement Vergleich Method möglichen ). Isolte von mit 3.2 Comprer Positivkontrolle. tout isolt suspect u témo positif Pltg Aufzeichnung (isolt ou lot Zhl ). -fizierter Smen je Compter Box Use sterilised n jem le nombre crylic Tg boxes Untersuchung. lids fectées or sterilised pr V. Petri pr boîte à chque nottion. dishes (CCP). Filterppiermetho 1.2 Asepticlly, lmr flow hood ech subsmple 100 seeds, sok sterilised blotter pper with 1. Métho Auslegensur buvrd sterilised wter plce blotter sterilised 1.1 Verwendung von sterilen Acrylboxen und Deckeln o crylic box or Petri dish (CCP). 1. Ensemencement sterilen Petrischlen (KKP) Utiliser Dr An eem f s ny Sterilrbeitspltz boîtes excess plstique wter from mit stérilisées steriler blotter vec Arbeitstechnik pper couvercle ou plce für s je boîtes Teilprobe pproprite Petri stériles von number 100 (CCP). Smen: seeds Tränken on von moistenelem Filterppier blotter septiquement (mximum sterilem sous hotte 100 Wsser seeds à flux und on lmire Auslegen blotter pour s steri- 1.2 Plcer chque feuchten ech 20 sous Filterppieres cm échntillon x 14 cm crylic sterilen 100 box, Acrylboxen, mximum o imbiber 34 Pet- seeds rischlen buvrd ech (KKP). vec 10 l eu cm x stérile 10 cm et crylic plcer box, le buvrd mximum Entfernung boîte plstique 25 seeds von überschüssigem stérilisée ech 9 cm-dimeter ou l Wsser boîte Petri und Petri Auslegen dish) stérile dns 1.3 l (CCP). (Fig geeigneten 1, b) (CCP). Anzhl Smen uf m feuchten Filterppier ech (mximl box or 100 Petri Smen dish with uf Filterppier sterilised lid. 1.4 Close eer Egoutter 20 Incubtion cm x 14 l excès (CCP) cm Acrylbox, d eu mximl du buvrd 34 Smen et plcer eer le nombre 10 Incubte cm x pproprié 10 cm seeds Acrylbox, n cubtor und mximl sur t le buvrd 25 C Smen humi (mximum eer h cm-petrischle) drk 100 to imbibe (Abb. 1, sur wter b) buvrd (KKP). from dns blotters. Lrger 20 cm seeds x 14 my cm, Boxen/Petrischle need mximum to imbibe 34 mit longer sterilem dns chque 1.4 boîte Verschließen chque Deckel. durtion boîte to ensure 10 qute cm x 10 cm, imbibition et mximum prior to 25 Inkubtion freezg dns step. (KKP) chque boîte Petri 9 cm dimètre) (Fig Inkubtion Freezg 1, b) (CCP). Smen eem Inkubtor bei C 1.4 Fermer für Trnsfer chque h seeds Dunkelheit boîte to plstique freezer um die ou t Wsserufnhme -18 boîte C to Petri -22 vec C vom un couvercle Filterppier h to stérilisé. kill durch die embryos. Smen Only zu ermöglichen. embryos tht Größere hve 2. Incubtion Smen imbibed können qute (CCP) für ee wter usreichen will be killed Quellung by this freezg ee längere Incuber step. Zeit Lrger les benötigen seeds my vor dns need m une Efrieren. étuve longer C durtion pendnt Efrieren freezg h to à kill l obscurité embryos pour qu elles mximum s imbibent number vec 3.1 l eu Überführen s buvrds. Smen Les plus grosses een Gefrierschrnk peuvent bei seeds. voir -18 C beso bis -22 C plus für temps h zum d imbibition Abtöten pour Embryonen. Nur qu elles Embryonen, sont bien die qut imbibées im vnt Wsser l étpe gequellt s ssurer 4. Post-freezg After freezg, cubte seeds n cubtor t congéltion. hben, wern durch ds Efrieren getötet. Größere C un dy/night cycle 12 h light 3. Congéltion Smen können ee längere Zeit s Efrierens benötigen, um die les größtmögliche dns Zhl un Smen congélteur mit getöteten -18 C à (ner-ultrviolet [NUV] cool white fluorescent 3.1 Trnsférer -22 C Embryonen light)/12 pendnt h zu drk. erhlten h pour tuer les embryons. Seuls les Exmtion Nch embryons m Efrieren (CCP) qui se sont imbibés correctement seront tués Nch Non-treted pr m cette Efrieren seed étpe is exmed wern congéltion. die t 5, Smen 9 Les 14 plus d eem fter grosses Inkubtor pltg. Treted bei peuvent C seed voir is mit lso Tg/Ncht-Wechsel beso exmed plus 21 d fter temps von plt- 12 h congéltion Licht g s (Ultrviolett-nhes seed tretments pour tuer les might embryons Licht slow [NUV] down d un und nombre kltes velopment Fluoreszenzlicht)/12.. (du Toit h Dunkelheit et l., 2005; kubiert. du Toit mximßes wei Après Untersuchung Hernez-Perez, congéltion (KKP) 2005; du Toit et l., 2007; du Toit Après Nicht-behelte Derie, congéltion, 2008; du Smen cuber Toit et wern les l., 2009; n Tg du dns Toit 5, 9 une et und l., étuve 14 à nch 2010) C m Auslegen vec un untersucht. cycle 12 Behelte h lumière Smen (proche wern Compre zusätzlich ny [NUV] suspect 21 d nch et isoltes lmpes m fluorescentes Auslegen untersucht, to lumière d 5.2 ultrviolette blnche) Stgutbehlungen positive control /12 h d obscurité. isolte die or Entwicklung seed lot. von 5.3 Observtion verzögern Record können number (CCP) (du Toit -fected et l., 2005; du Toit seeds und per Hernez-Perez, box t ech redg 2005; non tritées dy. du Toit sont et l., observées 2007; du 5, Toit 9 et und Les jours Derie, près 2008; ensemencement. du Toit et l., 2009; Les du Toit et tritées l., 2010). sont 5.2 églement Entfernen s observées Deckels 21 von j près n Boxen/Petrischlen ensemencement cr und les Intifiction tritements gründliche Untersuchung criteri peuvent jes ezelnen dimuer Smens le développement unter V. Zuhilfenhme. (du Toit ees et Mikroskops l., 2005; du (8 100 Toit et uf V. Hernez-Perez, Vergrößerung). : 2005; Exme du Toit pltes et l., miscroscleroti, 2007; du Toit et 5.3 Derie, Vergleich conidiophores 2008; du möglichen Toit conidi et l., Isolte 2009; typicl von du Toit V.. et l., 2010). mit 5.2 Microscleroti: Enlever Positivkontrolle. couvercle Blck survivl chque structures boîte plstique (Figs ou 2, boîte b 5.4 Aufzeichnung Petri 3, b) pour tht observer re Zhl msses ttentivement -fizierter melnised chque fungl Smen semence cells je pour Box rngg V. jem from Tg vec une µm Untersuchung. loupe dimeter boculire (Q et (grossissement Sorensen ). et l., 1991). l., 2008; 5.3 Intifizierungskriterien Conidiophores Comprer tout isolt conidi: suspect Verticillte, tree-like u témo structures with positif (isolt philis ou lot borne ). whorls on conidiophores, clumps hyle, sgle-celled conidi 5.4 Compter : le nombre Untersuchung fectées Pltten pr uf V. Mikrosklerotien, pr boîte à Konidienträger chque nottion. und typische Konidien borne t end ech phili (du Toit et l., 2005; von. du Toit Hernez-Perez, 2005) (Figs 3b, c). Mikrosklerotien: Schwrze Überduerungsstrukturen Critères (Abb. 2, d intifiction b und 3, b), die us eer großen Menge To terme potentil effect seed tretments on melnisierter Pilzzellen bestehen mit eer Größe von V., µm it is im importnt Durchmesser : Observer to distguish l (Q présence et l., between 2008; miscrosclérotes, Sorensen vible d et l., conidiophores microscleroti 1991). et conidies on typiques seeds by V. observg. velopment Konidienträger Microsclérotes : typicl und Forme Konidien: verticillte conservtion Wirtelige, conidiophores du chmpignon Bum-ähnliche seed couleur (verzweigte)-strukturen s those noire on (Figures which 2, microscleroti b mit et 3, Philin, b) contennt re observed die sich s on sme (Fig büschelrtig msses 4). The presence cellules us n fongiques microscleroti Konidienträgern mélnisées on biln llnt seed und without 10 Anhäufungen 230 μm von dimètre or without hylen (Q ezelligen presence et l., 2008; Konidien, newly Sorensen veloped die et sich l., à conidiophores, microscleroti m 1991). En je Phili blotter biln pper (du is n Toit diction et l., 2005; tht du Toit und sp. Hernez-Perez, on tht seed is not 2005) vible (Abb. (Fig 3b, 4b) c). (du Toit 7 032: 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) Gültig A Effectives prtir b l 11. 1Jnury 1 er jnvier enero

6 Vlidierte Chpter Méthos 7: Methon vlidées Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse Helth snitire Testg Methods s von Stgut Regls Interntionle Règles Interncionles Interntionles Vorschriften Interntionl pr pour für el les die Análisis Rules Essis Prüfung von ls Semences Semills Stgut Testg 7 032: 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) et Um Conidiophores l., n 2009; möglichen du Toit et conidies Effekt et l., 2010; von : Verticillés, Stgutbehlungen du Toit structures Hernez- uf en Perez, me 2005). d rbre zu bestimmen, comportnt ist es s wichtig philis zwischen disposées vitlen und verticilles toten Mikrosklerotien sur spp. les cn conidiophores be misintified m Smen et s with zu unterschein ms Acremonium hyls durch spp. which Beobchtung conidies, m unicellulires, conidiophores Entwicklung à tht l extrémimité resemble typischer those wirteliger chque V. Konidienträger. phili. However, (du m Toit selben et l., mycelium Smen 2005; n du m Toit Acremonium Mikrosklerotien et Hernez- spp. uftreten tends Perez, to velop (Abb. 2005) 4). (Figures to Ds rope-like Auftreten 3b, c). strs von Mikrosklerotien by 9 14 m d Smen redgs, ohne from Konidienträger which dividul o conidiophores ohne Auftreten brnch neuer gebilter Pour t right détermer ngles, Mikrosklerotien les which effets uf do potentiels Filterppier not normlly s ist m tritements e Anzeichen philis dfür, distct dss sur verticillte, whorls sp. m il est Smen (i.e., importnt nicht philis lebensfähig distguer re not les (Abb. verticillte) microsclérotes 4b) (du(fig Toit 3d). et vivnts l., Also, 2009; et Acremonium morts du Toit sur et les l., spp. 2010; do not du m Toit pr f observtion und microscleroti. Hernez-Perez, du développement 2005). conidiophores verticillés Or typiques species sur spp. l même knn mit semence Acremonium que hve celle spp. been sur verwechselt on observe wern. s Acremonium microsclérotes spp. biln (Figure ähnlich 4). L Konidienträ- présence lquelle found ssocited with spch seed, e.g. V. nigrescens, which hs ger microsclérotes wie. sur une Aber semence ds Myzel sns von conidiophores Acremonium ou spp. been re-nmed Gibellulopsis nigrescens (Iglesis-Grci entwickelt microsclérotes seil-rtige nouvellement Stränge développés nch 9 und sur 14 le d Inkubtion, buvrd, est et l., 2013; Villrroel-Zebllos et l., 2012). This fungus us une nen diction jeweils que eigene le Konidienträger sp. présent sich rechtwklig sur cette semence n est ps und vible welche (Figure kee 4b) Philin (du Toit et usgeprägten l., 2009; du ms conidiophores tht resemble those, verzweigen, but does not m microscleroti. Also, G. nigrescens wirteligen Toit et l., Wdungen 2010; Toit biln et Hernez-Perez, (z. B. die Philin 2005). sd nicht wirtelig) ms ty, (Abb. blck 3d). spp. chlmydospores Weiterh peut être confondu bilt Acremonium NP-10 vec gr Acremonium spp. medium kee spp. tht Mikrosklerotien. re qui much me smller s conidiophores thn microscleroti ressemblnt unimly à ceux V. round,. Ane but does Cependnt, -Arten not m le chlmydospores mycelium wurn d Acremonium n on blotter Sptsmen pper. spp. nchgewiesen, tendnce à développer z. tricorpus B., V. nigrescens, en lso filments hs später been regroupés umbennnt observed me on Gibellulopsis spch cor, seed, près nigrescens 9 tends à 14 jours to (Iglesis-Grci m d cubtion, yellow pigment et à l., prtir 2013; duquel NP-10 Villrroel-Zebllos se gr me (unlike s V. condiophores ), et l., 2012). lrger dividuels Dieser microscleroti Pilz à ngle bilt droit, thn Konidienträger, ne V. ment, die nen normlement von V. microscleroti ps ähneln, philis tend bilt to en be ber verticilles scttered kee et those qui Mikrosklerotien. typiques rom (c est pttern à G. dire, nigrescens les philis on bilt NP-10 ne sehr sont klee gr ps schwrze medium verticillées) wheres (Fig those 3d). De plus, V. NP-10 Acremonium Agr, tend die to spp. viel m kleer me concentric ls ps Mik- Chlmydosporen rosklerotien microsclérote. rgs (Fig 2). und eheitlich rund sd, uf Filterppier wern D utres kee Chlmydosporen espèces gebilt. ont été ssociées ux d éprd, tricorpus exemple, wur V. ebenflls nigrescens, n Sptsmen qui été renommé Generl Gibellulopsis methods und bilt nigrescens gelbfrbene (Iglesis-Grci Pigmente uf NP-10 et l., nchgewiesen Agr 2013; (ers Villrroel-Zebllos ls ), et l., größere 2012). Mikrosklerotien Ce chmpignon im Vergleich Checkg me s zu tolernces: conidiophores, und qui die ressemblent Mikrosklerotien à ceux neigen zu V. Verteilung, Tolernces mis zufälligen ne provi me ps Mustern mens microsclérotes. ssessg und uf NP-10 wher Eglement, Agr, or wohgegen G. nigrescens not vrition Mikrosklerotien me s chlmydospores results von with or fs mong konzentrische et noirs tests sur le Rge milieu sufficiently biln NP-10 (Abb. qui wi sont 2). to beucoup rise doubts plus petits bout que les ccurcy microsclérotes et ssy. prfiement Suitble ronds, tolernces mis tht ne me cn be ps pplied chlmydospores most direct sur seed le buvrd. helth tests cn be found Tble 5B to Allgemee Chpter 5 tricorpus Methon ISTA Rules, églement or été Hbook observé sur Tolernces d éprd, Mesures et tendnce Precision à produire un pigment Testg Überprüfung june by dns S. R. le Miles milieu (Proceedgs Tolernz: NP-10 gr Tolernzen (contrirement Interntionl erluben à V. ), ee Testg Abschätzung, s microsclérotes Assocition ob die 28 plus Vrition [1963] grs No. que 3, ceux Ergebnisse pge 644)., ees et les Testes microsclérotes o zwischen ont tendnce verschienen à être dispersés Tests usreichend fçon létoiredns groß ist o et sur nicht, le milieu um n NP-10 Genuigkeit gr lorsque ceux Ergebnisse zu ont zweifeln. tendnce Ee à mer Tolernztbelle, s cercles concentriques die für die Reportg results: The results seed helth test should dicte (Fig meisten 2). direkten Stgut-Gesundheitsprüfungen ngewent wern knn, ft sich Tbelle 5B Teil 1 scientific nme pthogen tected test method used. When reported on n ISTA Interntionl s Kpitels 5 ISTA-Vorschriften, o im Hbook Tolernces générles Mesures Precision Anlysis Certificte, results re entered un Méthos Or Testg Determtions. by S.R. Miles (Proceedgs Interntionl Vérifiction The report Testg s must Assocition tolérnces dicte : 28 [1963] size No. 3, smple pge 644). tested. Les In cse tolérnces negtive fournissent result (pthogen s moyens not d évluer tected), si l Berichterstttung vrition results must du be résultt reported Ergebnisse: dns s ou not entre tected. Der les Ergebnisbericht essis est suffisnte In eer Gesundheitsprüfung pour cse s ssurer positive result, l exctitu von Stgut report s sollte résultts. must n dicte wissenschftlichen percentge ppropriées, Nme fected s qui seeds. peuvent Krnkheitserregers être ppliquées und à die l Des tolérnces pluprt verwente s essis Metho d nlyse enthlten. snitire Bei Berichterstttung directs, peuvent être uf eem trouvées ISTA-Bericht dns le Tbleu sd die 5B Ergebnisse du chpitre unter 55 Wei- s Qulity ssurnce Règles tere Untersuchungsergebnisse ISTA, ou dns le tbleu ezutrgen. G1 du Hbook Der Prüfbericht muss die Mesures Anzhl untersuchter Precision Smen ngeben. Testg Tolernces Specific Im S.R. Flle Miles trg ees (Proceedgs negtiven Ergebnisses Interntionl (Krnkheitserreger nicht Assocition nchgewiesen), 28 [1963] müssen No. 3, die pge Ergebnisse 644). ls Testg This nicht test should nchgewiesen only be permed berichtet wern. by persons who hve Indiction been Im tred Flle s ees résultts fungl positiven intifiction : Ergebnisses or sollte un Prüfbericht résultts n Prozentstz someone d un test who fizierter qulité hs such Smen snitire trg. ngeben. vrient - direct supervision Les diquer le nom scientifique du pthogène et l métho utilisée. Dns le cs d un Certifict ISTA, les résultts Qulitätssicherung Criticl sont notés control sous «Autres pots détermtions (CCP)». Le rpport doit diquer l tille l échntillon testé. Spezifische En Opened cs bottles résultt Ausbildung négtif concentrted (pthogène NOCl non détecté), should be le résultt doit être noté comme «non détecté». stored refrigertor, 1.2% NOCl solution Diese En Untersuchung cs résultt sollte positif, nur von le rpport Personen doit durchgeführt diquer le be prepred just prior to tretg seed sub-smples wern, pourcentge die über entsprechen contmées. Fchkenntnisse (<1 h prior). It is responsibility user to monstrte level ctivity chlore solution mykologischen Bestimmung verfügen o die unter direkten Anleitung von Personen mit diesen Kenntnissen used. Chlore ctivity is quickly reduced presence oxygen orgnic mteril. Theree, do not stehen. Assurnce qulité Formtion use 1.2% spécifique solution more thn once. (Preprtion Kritische spch seeds, Kontrollpunkte steps ). (KKP) Ce For test doit NP-10 être rélisé method, pr s personnes 10 cm x qui 10 ont cm été crylic mées Geöffnete boxes à l intifiction (e.g. Flschen Hfmn fongique Mnufcturg, konzentrierter ou sous Inc.) NOCl l supervision re clud sd im quelqu un Kühlschrnk scription; mé. zu lgern, however, und or die 1.2% size crylic NOCl boxes Lösung or sollte Petri dishes unmittelbr cn be bei used. Verwendung It is responsibility zur Smenbehlung user to vorbereitet show equivlence wern (<1 h permnce vorher). Es liegt (Mterils Pots Verntwortung NP-10 critiques method s step Anwens contrôle 1.1). die (CCP) Wirksmkeit Chloridlösung For blotter zu method, zeigen, crylic Chloridktivität boxes (20 reduziert cm x 14 sich cm) bei Les re Anwesenheit clud bouteilles ouvertes von scription; Suerstf NOCl und however, concentrées orgnischen or doivent Mteril être crylic sehr stockées boxes schnell. u (e.g. Deswegen réfrigérteur 10 cm ist x ee et 10 l Wieverwendung cm solution crylic 1.2% boxes, von NOCl Hfmn 1,2% doit Mnufcturg, Lösung être préprée nicht extempornément vorzusehen Inc.) Petri (orbereitung dishes pour (9 triter cm size Spt-Smen, les dimeter) sous-échntillons cn be Schritt used. 1.2 It und is 1.3). responsibility (mos 1 h vnt). Für Il user est die to NP-10 show l responsbilité Metho equivlence sd s 10 utilisteurs permnce cm x 10 cm Acrylboxen (Mterils démontrer (z. le niveu B. Blotter Hfmn method chlore Mnufcturg, step ctif 1.1). dns Inc.) l solution Metho utilisée. beschrieben, chlore Acrylic ctif boxes dimue können lids rpiment jedoch cn be uch en sterilised Acrylboxen présence by d oxygène spryg erer Le Größe et with 70% mtière o isopropyl Petrischlen orgnique. lcohol verwent Donc, or ne equivlent ps wern. utiliser Es l liegt solution ir-dried Verntwortung 1.2% plus biologicl d une s Anwens fois sfety (Préprtion cbet zu zeigen, or s lmr dss flow die- n ses d éprd, hood. Mteril Optionlly, étpes gleichwertig 1.2 if et 1.3). biologicl ist (Mteril sfety und NP-10 cbet Metho, Pour lmr Schritt métho flow hood 1.1). NP-10, hs ultrviolet les boîtes light, plstique boxes 10 cm lids x or Für 10 cn cm die be (p. exposed Filterppiermetho ex. Hfmn to UV Mnufcturg, light sd Acrylboxen Inc.) m sont (20 fter clues cm x 14 dns lcohol cm) l scription hs dried Metho ; cependnt, beschrieben; dditionl s boîtes sterilistion können plstiques jedoch step; uch tilles however, Acrylboxen différentes this step ou erer cn s boîtes be Größe omitted (z. Petri if B. peuvent UV 10 cm light x être 10 is utilisées. not cm Acrylboxen, vilble Il est (NP-10 Hfmn l responsbilité gr Mnufcturg, medium step l utilisteur 1.1 Inc.) o Blotter montrer l équivlence (9 cm Durchmesser) (Mtériel et verwent métho NP-10 wern. étpe Es Petrischlen method step 1.1). liegt 1.1). Verntwortung s Anwens zu zeigen, For blotter method, Steel blue germtion blotter dss Pour dieses l métho Mteril sur buvrd, gleichwertig les boîtes ist (Mteril plstique und (20 Filterppier-Metho, x 14 cm) sont clues Schritt dns 1.1). l scription ; cependnt, cm pper (Anchor Pper Co.) is recommend; however, or germtion blotter pper cn be used. Different Acrylboxen s boîtes plstiques und Deckel tilles können différentes durch Besprühen (p. ex. 10 mit cm weights types blotter pper differ bility 70% x 10 Isopropnol cm, Hfmn o Mnufcturg, eem gleichwertigen Inc.) ou Mittel s boîtes sterilisiert to Petri bsorb wern (9 cm relese mit dimètre) nschliessenm wter, peuvent i.e. être Lufttrocknen type utilisées. blotter Il est steriler pper l responsbilité termes Atmosphäre. Optionl mount l utilisteur knn wter bei montrer Vorhense tht should l équivlence dd UV-Licht (Mtériel qute m et métho Sterilrbeitspltz seed imbibition buvrd étpe ee s this 1.1). Sterilisierung ffects be von von Les bility boîtes Boxen to kill plstique und Deckeln seed et couvercles durg durch UV-Licht peuvent freezg für être step. stérilisés It m is nch pr pulvéristion responsibility Isopropnolbehlung d lcool user 70% to ou show équivlent und Trocknung equivlence et séchés zusätzlich à permnce l ir dns erfolgen. un poste Bei type sécurité Nicht-Vorhense weight microbiologique blotter von ou pper UV- une Licht hotte used. à knn (Mterils flux uf lmire. diesen Blotter Schritt De fçon method verzichtet optionnelle, step wern 1.2). si le (NP-10 poste sécurité microbiologique ou l hotte à flux lmire A prtir Effectives Gültig l b 1 1. er Jnury jnvier enero

7 Règles Regls Interntionle Interntionles Interncionles Rules Vorschriften pour pr für les Testg el die Análisis Essis Prüfung Semences von ls Semills Stgut Vlidierte Méthos Chpter Methon vlidées 7: Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse snitire Helth Testg s von Methods Stgut Agr possè Sterilise Metho, une blotter lmpe Schritt ppers ultrviolette, 1.1 by und utoclvg Filterppier-Metho, les boîtes m et le twice couvercle t peuvent lest 1.1). 60 être m exposés t 121 ux C, UV with pendnt 24 h tervl mn Schritt Für près between die que Filterppier-Metho l lcool two utoclvgs; it séché pour wird or une sokg Steel étpe dditionnelle blue blotters germtion stérilistion. 70% blotter isopropyl pper Cette (Anchor lcohol étpe peut Pper or être equivlent Co.) omise empfohlen, si les sterilnt, UV ne es knn sont n ps jedoch disponibles dryg uch eres (NP-10 blotters Keimprüf-Filterppier Agr un étpe sterile 1.1 conditions et buvrd verwent étpe (e.g. 1.1). wern. lmr Unterschiedliche flow hood). (Blotter Gewichte method und step Arten 1.2). von Pour Results Filterppier l métho rg tests buvrd, unterschein (du le Toit, Steel sich 2011) glue germtion with ihrer Fähigkeit constnt blotter cubtion pper ufzunehmen (Anchor temperture Pper und Co.) 20 bzugeben, C est or recommé; constnt z. B. 24 bestimmt cepen- C did Wsser die dnt, not Art differ d utres s significntly Filterppiers buvrds die germtion Menge cince Wsser, peuvent die seeds être zugeführlisés. which Différents wern muss, grmmges ws dmit tected die types Smen (NP-10 qut buvrd method different quellen, step 2 uti- on wodurch dns Blotter leur uch cpcité method die à weitere step bsorber 2). Abtötung et relrguer beim l eu, Efrieren càd le beeflusst type The bility buvrd wird. to déterme tect Es liegt V. l quntité Verntwortung with d eu this qui test doit s Anwens joutée pour zu zeigen, une imbibition dss die verwenten optimle du Filterppiere fit que cel être cn be fluenced by presence or fungi, gleichwertig ffecte l cpcité sd. à (Mteril tuer l semence und Filterppier-Metho, pendnt l étpe ctomycetes, or bcteri on seed or biologicl Schritt congéltion. 1.2) Il est l responsbilité s utilisteurs seed tretments. These microorgnisms cn fluence Sterilisierung démontrer l équivlence Filterppiere permnce durch zweimliges du type Autoklvieren grmmge für mstens buvrd employé 60 m (Mtériel bei 121 C, et mit métho eem et relibility test (NP-10 method step 3 Blotter method step 5). 24 buvrd h Intervll étpe 1.2) zwischen bein Autoklvierschritten; o Stériliser It is recommend Eweichen les buvrds s en Filterppiere les confirmtion utoclvnt 70% step ux Isopropnodnt tht fois ech pen- seed o u on mos which gleichwertigem 60 mn à 121 C, Sterilium hs not vec mit yet un nchfolgenm been tervlle tected, Trocknen 24 be flipped h entre over ux Filterppiere on utoclvges; fl unter redg ou sterilen tremper to check Bedgungen les buvrds (z. dns presence B., Sterilrbeitspltz). l lcool à 70% where ou (Filterppier-Metho, équivlent seed is et lisser contct Schritt sécher with 1.2). les buvrds blotter (Blotter en conditions method stériles step 5). (p. ex. sous hotte à Ergebnisse flux The lmire) mount von (Métho wter Rguntersuchungen dd buvrd to étpe blotter (du 1.2). Toit, will 2011) ffect mit Les résultts konstnter bility du Tempertur test comprtif seed to von imbibe (du 20 C Toit, bei qutely 2011) Inkubtion tempérture ree, o konstnten be d cubtion killed 24 C by beeflussten constnt freezg 20 C step. nicht ou If signifiknt 24 C seed vec, une n n ont does Nchweis not ps imbibe montré von enough V. différence wter fizierten becuse significtive Smen blotters du tux (NP-10 re Metho, too dry, détectées Schritt seed 2 will comme und not Filterppier-Metho, be contmées killed durg pr Schritt freeze 2). (Métho step, will NP-10 contue étpe 2 to et germte Métho buvrd over étpe durtion 2). Die L cpcité Möglichkeit ssy, à mkg détecter s Nchweises it V. difficult vec to von exme ce test peut knn seed être fluencé microscopiclly dieser Untersuchung pr l présence over multiple durch d utres die redgs. Anwesenheit chmpignons, If too erer much scomycetes wter Actomyceten is ou dd bctéries to sur o les blotters, Bkterien growth ou m vec Smen s bcteri o tri- Pilze, biolgischer tements present /on biocontrôle. Stgutbehlungen seed will Ces impe microorgnismes beeflusst velopment wern. peuvent Diese fluencer. Mikroorgnismen l (Blotter justesse method du test können step (Métho die 1.3). Zuverlässigkeit NP-10 étpe 3 et Untersuchung Métho buvrd beeflussen étpe 5). (NP-10 Metho, Schritt 3 und Il est Filterppier-Metho, recommé comme Schritt étpe 5). confirmtion que Medi Es chque wird semence empfohlen solutions ls Bestätigung, n ps été dss détecté je soit Smen, déplcée m lors l lecture nicht fle nchgewiesen pour vérifier wur l présence bei n Sodium letzten Untersuchung hypochlorite là où l umgedreht semence solution étit wird en um contct ds Auftreten vec le von buvrd (Métho n buvrd Stelle étpe zu prüfen, 5). wo Smen im A sodium Kontkt L quntité hypochlorite mit d eu m Filterppier joutée solution sur wr le buvrd pretretment (Filterppier-Metho, possibilité v ffecter seed l cn be Schritt prepred 5). d imbibition from commercil l semence blech et diluted donc s to cpcité 1.2% ctive Die gredient à m être Filterppier tuée (sodium pr l zugefügte hypochlorite). congéltion. Menge Si The l Wsser semence concentrtion beeflusst ps sez die imbibée, Fähigkeit prce s Smens que le qut buvrd zu est quellen, trop sec, und l n est chlore commercil blech vries consibly. Use letztlich semence ds ne ser Abtöten ps beim tuée pr Efrieren. l étpe Wenn congéltion Smen et mul: unzureichend contuer à germer quillt, weil u cours ds Filterppier s différentes zu trocken observtions. Si Smen trop d eu beim est Efrieren joutée u nicht buvrd bgetötet l croissnce und im ist, wird V weiteren s stock = (V bctéries Verluf fl C présentes fl ) / C Inkubtion sur/dns stock les keimen, wodurch v empêcher le développement Untersuchung Smen (Métho n wie- buvrd die mikroskopische (where holten étpe V 1.3). = Tgen volume schwierig C = % wird. ctive Wenn chlore) m Filterppier to clculte zuviel volume Wsser commercil zugeführt blech wird, wird stock ds solution m/im required Smen to prepre uftreten Bkterienwchstum sodium hypochlorite die Entwicklung solution von seed V. tretment. For verhn exmple, (Filterppier-Metho, to prepre 1 litre Schritt solution 1.3). sodium hypochlorite contg 1.2% sodium hypochlorite from stock commercil blech contg 12% ctive chlore: Medien Milieux V stock = (Vet und fl solutions CLösungen fl ) / C stock = (1 L 1.2%) / 12% = 0.1 L (or 100 ml) Ntrium-Hypochloridlösung Solution sodium hypochlorite Thus, dd 100 ml 12% stock to 900 ml wter. Die Une Ntriumhypochloritlösung solution sodium hypochlorite für die Vorbehlung pour le pré-tritement s knn us frischer peut être helsüblicher préprée à prtir Bleich- d eu (Nt- Smen riumhypochlorit-) NP-10 jvel commercile gr medium diluée luge, pour verdünnt obtenir uf 1.2% 1,2% verfügbres chlore ctif Chlor (sodium hergestellt hypochlorite). wern. L Die concentrtion Chlorkonzentrtion chlore dns für Industriezwecke l eu (Modified jvel from commercile Sorenson s genutzter NP-10 Ntriumhypochloritluge vrie gr beucoup. medium, Utiliser Kbir vriiert mule: l., 2004; beträchtlich. Sorensen Für et l., die 1991.) Berechnung s Volumens et l Bleichluge-Stmmlösung, die für die Herstellung Ntriumhypochloritlösung V stock = (V fl C fl ) zur / CSmenvorbehlung stock erlich ist, ist folgen Formel zu verwenn: Bottle A components Quntity (où V = volume et C = % chlore ctif) pour clculer le volume V Stmmlsg. Polyglcturonic cid, 5.0 g d eu = (V Endkonz. jvel commercile C Endkonz. ) / C Stmmlsg. nécessire pour préprer N slt from ornge, l SIGMA solution Gr pour (P-3889) le tritement. Pr exemple, (Wobei pour NOH préprer Pellets V = Volumen, 1 litre C 1.2 = solution % g verfügbres sodium Chlor). hypochlorite Beispiel: Zur contennt (0.025 Herstellung N) 1.2% von 1000 sodium ml hypochlorite eer Ntriumhypochloritlösung Distilled mit or jvel 1,2% ionised commercile Chlor us 500 eer contennt mlvorrätigen 12% helsüblichen chlore ctif: d une solution d eu Ntriumhypochloritluge wter up to mit 12% verfügbrem Chlor: V stock = (V fl C fl ) / C NOH concentrtion bottle stock A becomes pproximtely V Stmmlsg. = (V Endkonz. C Endkonz. ) / C N. Stmmlsg. = (1 L 1.2%) / 12% = 0.1 L (ou 100 ml) = (1 l 1,2%) / 12% = 0,1 L (o 100 ml) Donc, Bottle B jouter components 100 ml Quntity l solution mère à 12% à 900 ml d eu. Folglich sd 100 ml 12-prozentigen Ntrium- Agr (Difco Bcto) hypochloritlösung-stmmlösung 15.0 g zu 900 ml Wsser hzuzufügen. KNO g Milieu KH 2 PO 4 NP-10 gr1.0 g KCl 0.5 g (NP-10 MgSO 4.Hgr Agr 2 0 Sorenson 0.5 gmodifié, Kbir et l., 2004; Sorensen Tergitol NP-10 et l., 1991.) 0.5 ml (Modifizierter Distilled or ionised Sorenson s 500 NP-10 ml Agr, Kbir et l., 2004; wter up to Sorensen et l., 1991.) Chlormphenicol Ingrédients récipient stock A 0.5 Quntité ml solution Komponenten Flsche A Menge Streptomyc Aci sulphte gml stock polyglcturonique, Polyglcturonsäure, solution b Ntriumslz von Ornge, SIGMA sodium Gr ornge, (P-3889) 5,0 g Chlortetrcycle sel 3.3 ml hydrochlori NOH SIGMA Plätzchen Gr stock (P-3889) (0,025 N) 1,2 g NOH solution Auffüllen mit pstilles stilliertem/ 1.2 -ionisiertem g (0.025 WsserN), b, c Eu Add distillée fter ou utoclvg. désionisée NOH Konzentrtion jusqu à Flsche A liegt ungefähr bei 0,025 N. obtention Bottle A + Bottle B Quntity (once Komponenten L concentrtion cooled to 50 Flsche C) NOH B en récipient A revient pproximtivement Bottle A à N. Menge Agr (Difco Bcto) 15,0 g Bottle B KNO 3 1,0 g Totl volume 1000 ml KH 2 PO 4 1,0 g KCl 0,5 g MgSO 4.H 2 0 0,5 g Tergitol NP-10 0,5 ml Auffüllen mit stilliertem / -ionisiertem Wsser Chlormphenicol Stocklösung 0,5 ml Streptomyc-Sulphtstocklösung b 2,0 ml Chlortetrcycle-HCL-Stocklösung c 3,3 ml, b, c Zugbe nch m Autoklvieren : 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) Gültig A Effectives prtir b l 11. 1Jnury 1 er jnvier enero

8 Vlidierte Chpter Méthos 7: Methon vlidées Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse Helth snitire Testg Methods s von Stgut Regls Interntionle Règles Interncionles Interntionles Vorschriften Interntionl pr pour für el les die Análisis Rules Essis Prüfung von ls Semences Semills Stgut Testg Ingrédients récipient B Quntité b Récipient A + B Quntité (refroidi à 50 C) Agr (Difco Bcto) 15.0 g Récipient A KNO g Récipient B KH 2 PO g Volume totle 1000 ml KCl 0.5 g MgSO 4.H g Tergitol NP ml Eu distillée ou désionisée jusqu à obten- tion Chlormphenicol solution 0.5 ml mère Streptomyc sulphte 2.0 ml solution mère b Chlortetrcycle Figure Abb Schemtische Drwg (not 3.3 Zeichnung to scle) ml showg (nicht mßstbsgerecht) n exmple zeigt lyout e Beispiel 34 spch für ds seeds Auslegen on Steel 34 blue Sptsmen blotter or NP- uf hydrochlori solution 10 Steel mère gr c blue blotter 10 cm (Filterppier) x 10 cm Hfmn o crylic NP-10 box. Agr b Photogrph eer 10 cm showg x 10 cm 100 Hfmn spch Acrylbox. seeds on b Foto blotter zeigt pper 100 Sptsmen cm crylic uf Filterppier box. Ultimtely, eer size 20 cm x shpe 14 cm crylic box box. compel Acrylbox. seed Letzlich rrngement. bestimmen Größe und Form Box die 20 cm x 14, b, c Smennordnung. Ajouter près utoclvge. b b 7 032: 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) b Figure 2. Microscleroti med b concentric rgs on NP-10 gr medium (no mgnifiction, photogrph courtesy B. Brenner). b Microscleroti on blotter (60x mgnifiction, photogrph Figure 1. Dess (ps à l échelle) montrnt un exemple modèle dépôt 34 d éprd sur buvrd courtesy Abb. 2. Mikrosklerotien G. Hiddk). von konzentrische Rge bilnd uf NP-10 Agr (kee Vergrößerung, Foto Steel blue ou milieu NP-10 gr dns une boite Hfmn 10 cm x 10 cm. b Photo montrnt 100 d éprd mit freundlicher Genehmigung von B. Brenner). b Mikrosklerotien von uf Filterppier (60x Vergrößerung, Foto mit freundlicher Genehmigung von G. Hiddk). Storge sur buvrd dns une boite plstique 20 cm x 14 cm. En f compte, l tille et l me l boîte ment Preprtion l gencement s gres. 1. Prepre utoclve (120 C 20 m) contents Store prepred crylic boxes with NP-10 gr medium t Bottle A Bottle B seprtely C drk no more thn 4 weeks. 2. Flsche Cool A both + Flsche bottles B to 50 Menge C slowly (e.g. by plcg ionisiertes o stilliertes Wsser, sterilisiertes (nch Abkühlung uf 50 C) bottles hot wter bth set t 50 C). Wsser); und jeweils filtersterilisieren. Lgerung Flsche A 3. Prepre stock solution chlortetrcycle (15 mg/ml Stocklösungen im Kühlschrnk. Flsche B methnol), chlormphenicol (100 mg/ml methnol), 4. Zugbe jeweiligen Menge je Antibiotikstocklösung zu Flsche B und gut vermischen. Gesmtvolumen 1000 ml streptomyc sulphte (25 mg/ml ionised or distilled, sterilised wter); filter-sterilise ech. 5. Zugbe von Flsche A Flsche B. Store stock solutions refrigertor. 6. Gründliches Mischen uf m Mgnetrührer. Herstellung 4. Add pproprite mount ech ntibiotic stock 7. Ausgießen von 35 ml flüssigem NP-10 Agr sterile Acrylboxen (10 cm x 10 cm) o 25 ml 9 cm Petrischlen (40 Pltten/L NP-10 Agr). solution to Bottle B mix well. 1. Seprte Herstellung und Autoklvieren (120 C für 5. Add contents Bottle A to Bottle B. 20 m) Flschen A und B. 6. Mix thoroughly usg mgnetic stir plte stir br. 2. Lngsmes Abkühlen Flschen uf 50 C (z. b B. 7. Dispense 35 ml molten NP-10 gr medium to durch Inkubtion im Wsserbd bei 50 C). Lgerung ech sterilised crylic box (10 cm x 10 cm) or 25 ml 3. Figure Herstellen 2. Microsclérotes Stocklösungen von Chlortetrcycle en cercles concentriques sur milieu NP-10 (sns grossissement, photogrphie (15 to ech mg/ml 9 cm vec l utoristion Methnol), dimeter Petri Chlormphenicol dish (40 pltes/l B. Brenner). b Microsclérotes (100 NPmg/ Lgerung vorbereiteter sur Acrylboxen buvrd (grossissement mit NP-10 Agr 60, bei photogrphie ml 10 gr Methnol), medium). vec l utoristion und Streptomyc-Sulpht G. Hiddk). (25 mg/ml 4 10 C im Dunkeln für längstens 4 Wochen A prtir Effectives Gültig l b 1 1. er Jnury jnvier enero

9 Règles Regls Interntionle Interntionles Interncionles Rules Vorschriften pour pr für les Testg el die Análisis Essis Prüfung Semences von ls Semills Stgut Vlidierte Méthos Chpter Methon vlidées 7: Vlidted pour zur Gesundheitsprüfung nlyse snitire Helth Testg s von Methods Stgut b b Figure 4. Vible Microsclérotes microscleroti vivnts Abb. 4. growg poussnt Leben on sur Mikrosklerotien blotter l fce versus, du buvrd. von b non-vible microscleroti b Microsclérotes uf Filterppier on non-vibles spch gebilt seed, sur im une bsed Gegenstz semence on zu, lck d éprd, nicht microscleroti lebenn bsé sur Mikrosklerotien mg mnqué on n microsclérotes Sptsmen blotter plus lck més durch ds conidiophores sur Fehlen le buvrd plus observed Mikrosklerotienbildung le mnque on pericrp uf m conidiophores Filtrppier und observés m Fehlen sur le péricrpe Konidienträger près m fter cubtg plted seed 14 to 21 d une cubtion Perikrp nch s Inkubtion 14 usgelegten à 21 j (photogrphie Smen für (photogrphs courtesy E. Gilijmse). vec 14 bis l utoristion 21 d (Fotos mit E. freundlicher Gilijmse). Genehmigung von E. Gilijmse). c d Figure Abb Typische Typicl Structures typiques structures Strukturen on n spch Sptsmen. sur une seed. semence Mikrosklerotien Microscleroti d éprd. von V. Microsclérote (Foto (photogrph mit freundlicher courtesy (photogrphie vec Genehmigung G. l utoristion Hiddk). von b Mycelium G. G. Hiddk). microscleroti b Myzel b Mycélium und Mikrosklerotien et V. microsclérote (photogrph V. von (photogrphie courtesy (Foto mit freundlicher L. vec du Toit). l utoristion c Genehmigung Conidiophores L. du von Toit). V. L. du c Toit). Conidiophores c Konidienträger (photogrph V. courtesy von (photogrphie G.Hiddk). (Foto mit d vec Conidiophores freundlicher l utoristion Genehmigung G. mycelium Hiddk). von d n Conidiophores G.Hiddk). Acremonium d et Konidienträger spp. mycélium (photogrph d Acremonium und courtesy Myzel spp. G.Hiddk). (photogrphie von Acremonium vec spp. l utoristion (Foto mit freundlicher G. Hiddk). Genehmigung von G.Hiddk). References Literturquellen Préprtion Block, C. Shepherd, L. (2008). Procedure Block, C. Shepherd, on L. spch (2008). seed. Procedure Smple 1. Preprtion Préprer et Workg utoclver Instructions (120 C spch pendnt WI-687. seed. 20 Iow Smple mn) Stte University contennu Preprtion s Workg récipients Helth Instructions A Lb, et B Ames, séprément. WI-687. IA. Iow Stte Cummgs, 2. Refroidir University J. doucement A., Miles, Helth les C. Lb, ux A. Ames, récipients du Toit, IA. à L. 50 C J. (2009). (p. ex. Cummgs, Greenhouse en plçnt J. les A., evlution récipients Miles, C. A. dns seed un du b Toit, drench d eu L. tretments J. chu (2009). à 50 C). Greenhouse orgnic evlution mngement seed soilborne drench pthogens tretments 3. spch. Préprer orgnic Plnt une solution mngement Disese, mère 93, chlortetrcycle soilborne pthogens (15 mg/ Derie, ml spch. M. methnol), L., Plnt Gbrielson, Disese, chlormphenicol 93, R L. (100 Steen, mg/ml M. (1988). methnol), M. et streptomyce L., Derie, Clini Plnt Gbrielson, Disese sulphte Conference R. L. (25 mg/ml Steen, & Workshop, eu M. distillée (1988) ou Clini désionisée Plnt stérile; Disese et Conference stériliser pr filtrtion Workshop, chque November Clini Stte University, Long Stocker November les solutions Clini mères u réfrigérteur. Stte University, Long Bech, CA. 4. Ajouter Bech, CA. l quntité ppropriée chque solution mère du Toit, L. J. (2011). ISHI Spch Rg Test. du Toit, d ntibiotique L. J. (2011). u récipient ISHI Spch B et bien mélnger. Rg Test. Method vlidtion report. ISHI-Veg, ISF. 6 pp. 5. Ajouter Method les vlidtion contenus report. du récipient ISHI-Veg, A u ISF. récipient pp. B. du Toit, L. J. Derie, M. L. (2008). Freeze-blotter 6. du Mélnger Toit, L. J. vigoureusement Derie, M. L. en (2008). utilisnt Freeze-blotter un brreu spch mgnétique. spch seed seed helth helth ssy ssy protocol protocol Stemphylium Stemphylium 7. botryosum, Dispenser botryosum, 35 Cldosporium Cldosporium ml du mileu vribile, vribile, NP-10 gr liqui dns. chque. boîte Lb Lb protocol protocol plstiques stériles Vegetble Vegetble (10 cm x 10 Pthology Pthology cm) ou Progrm 25 dns chque t boîte Wshgton Petri Stte 9 cm University (40 boîtes/l Mount Vernon milieu NP-10 NWREC, gr). Mount Vernon, WA. du Toit, L. J., Derie, M. L. Brissey, L. M. (2007). du Evlution Toit, L. J., Derie, fungicis M. L. Brissey, control L. M. seedborne (2007). Stockge Stemphylium Evlution botryosum fungicis on spch, control seedborne Plnt Disese Stemphylium Mngement botryosum Reports, on 1, spch, ST Plnt du Conserver Disese Toit, L. les Mngement J., boîtes Derie, plstiques Reports, M. L., préprées 1, Brissey, ST003. vec L. le M. milieu NP-10 du Holmes, Toit, gr L. B. à J., 4 10 C J. (2010). Derie, à l obscurité M. Evlution L., Brissey, ps seed plus L. tretments M. qutre semes. Holmes, mngement B. J. (2010). Evlution seedborne seed tretments Stemphylium mngement spch, seedborne Plnt Disese Mngement Stemphylium Reports, spch, 4, ST Plnt Disese du Toit, Mngement L. J., Derie, Reports, M. L., 4, Brissey, ST038. L. M., Holmes, B. du Toit, Gtch, L. J., E. Derie, W. (2009). M. L., Evlution Brissey, L. M., seed Holmes, tretments B. Gtch, mngement E. W. (2009). seedborne Evlution seed tretments spch, mngement seedborne spch, Plnt Disese Mngement Reports, 3, ST Plnt Disese Mngement Reports, 3, ST020. du Toit, L. J., Derie, M. L. Hernez-Perez, P. (2005). du Toit, L. J., Derie, M. L. Hernez-Perez, P. (2005). wilt spch seed production. Plnt wilt spch seed production. Plnt Disese, 89, Disese, 89, du Toit, L. J. Hernez-Perez, P. (2005). Efficcy du Toit, L. J. Hernez-Perez, P. (2005). Efficcy hot hot wter wter chlore chlore erdiction erdiction Cldosporium Cldosporium vribile, vribile, Stemphylium Stemphylium botryosum, botryosum, from from spch spch seed. seed. Plnt Plnt Disese, Disese, 89, 89, : 7-032: : n on sur Spci olerce (Spt) (spch) (éprd) Gültig A Effectives prtir b l 11. 1Jnury 1 er jnvier enero